PEMERIKSAAN STREPTOCOCCCUS

PEMERIKSAAN STREPTOCOCCCUS

Hari pertama :

1.       Pewarnaan Gram Original

Bahan                   :               biakan kuman staphylococcus

Reagen                                 :               Gentian Violet

                                                Gram’s iodine

                                                Alcohol 95 %

                                                Safranin 1%

Cara kerja            :

a.       Pemeriksaan mikroskopis dengan pengecatan Gram dari bahan pemeriksaan , preparat dibiarkan kering dan difiksasi

b.      Tuangkan dengan gentian violet selama 1 menit

c.       Cuci dengan air

d.      Tuang dengan gram iodine selama 30 detik

e.      Cuci dengan air

f.        Decolourisasi dengan alcohol 95%

g.       Cuci dengan air

h.      Counterstain dengan safranin 1 % selama 2 menit

i.         Cuci dengan air dan biarkan kering

j.        Periksa dengan pembesaran mikroskop pembesaran objektif

Hasil : gram (+) coccus ( + )

2.       Penanaman kuman pada media padat

Bahan                   :               biakan kuman staphylococcus

Media                   :               a. NAP ( nutrient agar plate )

                                                b. BAP ( blood agar plate )

  

Cara kerja :
 Ambil biakan kuman staphylococcus tanam pada media NAP atau BAP . inkubasi suhu 35 – 37 ⁰C Selam 18 -24 jam

HARI KE II

3.       Pengamatan morfologi  koloni

MEDIA	NAP	BAP
Bentuk koloni
Pigmen
Peninngian permukaan
Pinggir koloni
Karakteristik optic
Aktivitas kuman terhadap darah

No	Pengamatan koloni	Umur biakan 2 x 24 jam suhu kamar
		NAP	BAP
	Bentuk koloni
	Pigmen
	Peninngian permukaan
	Pinggir koloni
	Karakteristik optic
	Aktivitas kuman terhadap darah

4.       Tes katalase

bahan                   :               koloni kuman bebas darah

reagen                  :                H₂O₂ 3-10%

cara kerja            :              

a.       Ambil koloni kuman dari media bebas darah , letakkan pada objek gelas

b.      Teteskan  reagent

c.       Amati terjafinya gelembung udara

Hasil : (+) terjadi gelembung udara

5.       Pembuatan biakan murni

a.       Dari koloni yang tumbuh pada media NAP atau BAP di buat biakan murni , dengan cara mengambil koloni terpisah , kemudian tanam pada bouillon  dan buat preparat. ( untuk mengetahui apakah biakan benar2 murni

b.      Inkubasi selama 35 -37 ⁰C 10 – 30 menit

6.       Tes biokimia

media                   :               Bile esculin

                                                manitol

                                                laktosa

                                                litmust milk

                                                NaCl 6,5% ( NaCl tolerance)

cara kerja            :

a.       Tanamkan biakan murni pada media glukosa , manitol, dan saccarosa

b.      Inkubasi selama 35 -37 ⁰C  selama 18 – 24 jam

7.       Tes CAMP ( Cristie Athin Much Peterson )

( untuk D streptococcus β hemolisa)

Bahan                   :               Biakan kuman streptococcus

                                                Kuman standar staphylococcusaureus flazen

                                                Control streptococcus grup B

Media                   :               BAP

Caranya :

1.       Siapkan media BAP

2.       Ambil Kuman standar staphylococcus aureus flazen

3.       Gores pada BAP membentuk garis tegak lurus membelah media menjadi 2 bagian

4.       Kemudian ambil kuman Control streptococcus grup B membentuk garis tegak lurus

8.       Tes Resistensi

Media                   :               BAP

Bahan                   :               Biakan Murni Streptococcus

Disk                        :               Baci Trasin ( Untuk streptococcus β hemolisa )

                                                Optochin (Untuk streptococcus α dan gamma hemolisa

Cara kerja            :

a.       Ambil kapas lidi steril

b.      Celupkan dalam biakan murni

c.       Peras kapas lidi dengan memutarnya pada dinding abung

d.      Goreskan kapas lidi tadi pada media BAP secara merata

e.      Biarkan ± 5 menit

f.        Letakkan disk di tengah2 media dengan menjepit disk dengan pinset , tekan supaya disk benar benar menempel pada media

g.       Inkubasi selama 35 -37 ⁰C  selama 18 – 24 jam

h.      Ukur diameter zona inhibisi disk :

PEMERIKSAAN IDENTIFIKASI STAPHYLOCOCCUS

PEMERIKSAAN STAPHYLOCOCCCUS

Hari pertama :

1.       Pewarnaan Gram Original

Bahan                   :               biakan kuman staphylococcus

Reagen                  :                  Gentian Violet

                                                Gram’s iodine

                                                Alcohol 95 %

                                                Safranin 1%

Cara kerja            :

a.       Pemeriksaan mikroskopis dengan pengecatan Gram dari bahan pemeriksaan , preparat dibiarkan kering dan difiksasi

b.      Tuangkan dengan gentian violet selama 1 menit

c.       Cuci dengan air

d.      Tuang dengan gram iodine selama 30 detik

e.      Cuci dengan air

f.        Decolourisasi dengan alcohol 95%

g.       Cuci dengan air

h.      Counterstain dengan safranin 1 % selama 2 menit

i.         Cuci dengan air dan biarkan kering

j.        Periksa dengan pembesaran mikroskop pembesaran objektif

Hasil : gram (+) coccus ( + )

2.       Penanaman kuman pada media padat

Bahan                   :               biakan kuman staphylococcus

Media                   :               a. NAP ( nutrient agar plate )

                                                b. BAP ( blood agar plate )

BAP (blood agar plate)

   

Cara kerja :
 Ambil biakan kuman staphylococcus tanam pada media NAP atau BAP . inkubasi suhu 35 – 37 ⁰C

HARI KE II

3.       Pengamatan morfologi  koloni

MEDIA	NAP	BAP
Bentuk koloni
Pigmen
Peninngian permukaan
Pinggir koloni
Karakteristik optic
Aktivitas kuman terhadap darah

4.       Tes katalase

bahan                   :               koloni kuman bebas darah

reagen                  :                H₂O₂ 3-10%

cara kerja            :              

a.       Ambil koloni kuman dari media bebas darah , letakkan pada objek gelas

b.      Teteskan  reagent

c.       Amati terjafinya gelembung udara

Hasil : (+) terjadi gelembung udara

5.       Pembuatan biakan murni

a.       Dari koloni yang tumbuh pada media NAP atau BAP di buat biakan murni , dengan cara mengambil koloni terpisah , kemudian tanam pada bouillon  dan buat preparat. ( untuk mengetahui apakah biakan benar2 murni

b.      Inkubasi selama 35 -37 ⁰C 10 – 30 menit

6.       Tes fermantase

Media                   :               TYEA ( Tripton Yeast Extract Agar ) solid

                                                TYEA ( Tripton Yeast Extract Agar ) semi solid

Cara kerja            :

a.        Biakan murni ditanam pada media TYEA solid dan semi solid dengan ose jarum

b.      Salah satu media ditutup dengan Parafin cair

c.       Inkubasi selama 35 -37 ⁰C  selama 18 – 24 jam

7.       Tes biokimia

media                   :               glukosa

                                                manitol

                                                saccarosa

cara kerja            :

a.       Tanamkan biakan murni pada media glukosa , manitol, dan saccarosa

b.      Inkubasi selama 35 -37 ⁰C  selama 18 – 24 jam

8.       Tes koagulase

8.1. Cara tabung

Bahan           :               biakan murni

                                        Darah vena

Reagen         :               Na.sitrat 3,8%

                                        NaCl 0,9%

Cara kerja    :

a.       Ambil darah vena kemudian tambah anti koagulan Na.sitrat dengan perbandingan 4:1

b.      Masukkan dalam tabung sentrifuge , sentrifuge 1500 rpm 15 menit

c.       Ambil plasmanya, encerkan dengn NaCl 0,9% steril 1 : 5

d.      Pipet 2 cc masukkan masing2 1 cc ke dalam 2 buah tabung reaksi steril

e.      Tabung 1 ditambah bikan murni 0,5 cc

f.        Tabung 2 sebagai control

g.       Inkubasi selama 35 -37 ⁰C  selama 18 – 24 jam

h.      Hasil (+) bila terjadi penggumpalan

8.2. Cara slide

Cara kerja    :

a.       1 ose plasma diteteskan pada objek gelas

b.      Amil salah satu biakan murni dengan ose.

c.       Canpurakan dengan plasma diatas objek gelas

d.      Di goyang searah jarum jam, kemudian baca hasilnya yang di bandingkan dengan control NaCl fisiologis

e.      Hasil (+) bila terjadi penggumpalan

9.       Resistensi terhadap novobiacin (NV)

Media                   :               Mueller Hinton Agar ( MH )

Bahan                   :               Biakan Murni

Cara kerja            :

a.       Ambil kapas lidi steril

b.      Celupkan dalam biakan murni

c.       Peras kapas lidi dengan memutarnya pada dinding abung

d.      Goreskan kapas lidi tadi pada media MH tiga arah

e.      Biarkan ± 5 menit

f.        Letakkan disk novobiocin di tengah2 media dengan menjepit disk dengan pinset , tekan supaya disk benar benar menempel pada media

g.       Inkubasi selama 35 -37 ⁰C  selama 18 – 24 jam

h.      Ukur diameter zona inhibisi disk :

Hasil                               :               sensitive bila d  > 22 mm

                                                        Resisten bila d < 22 mm

                                                        Intermediet bila d = 22 mm

HARI KE III

1.       PEMBACAAN HASIL DAN DIAGNOSA :

MEDIA / TEST	Hasil	Hasil	Hasil
TYEA solid	+	+	+
TYEA semi solid	+	+	+
Glukosa	+/g-	+/g-	+/g-
Manitol	+/g-	-	+/g-
Saccarosa	+/g-	+/g-	+/g-
Koagulase	+	-	-
Resistensi test	Sensitive	Sensitive	Resisten
Diagnose	S. aureus	S. Epidermidis	S.saprophylicus